EV-Up™ MSC용 EV 생산 기초 배지/보충제

특징

• 기존 혈청 첨가 배지에 비해 EV 생성량 증가
• EV의 생물학적 활성 향상
• MSC의 높은 생존율 유지

적용 가능한 세포

유래 종에 관계없이 광범위한 MSC에 적용 가능합니다.

세포 예시

• 골수 유래 MSC
• 지방 유래 MSC
• 제대혈 유래 MSC

MSC 배양 배지에 관하여

본 제품은 모든 배양 배지와 호환됩니다. MSC를 이용한 EV 생산의 경우, MSCulture™ High Growth Basal Medium/Supplement를 권장합니다.

실험 절차 예시 (6-웰 플레이트)

1. MSC를 5 × 10^³ 세포/cm^²의 밀도로 접종하고, 세포 밀도가 80–90%에 도달할 때까지 배양 배지에서 배양합니다.
2. 성장 배지를 제거하고, 보충제가 포함된 EV-Up™ MSC용 EV 생산 기초 배지(AF) 4 mL를 첨가한 후 3–5일간 배양합니다.
3. 세포 배양 상층액을 채취하고 2,000 × g에서 20분간 원심분리합니다. 펠릿을 건드리지 않도록 주의하며 상층액을 새로운 튜브로 옮깁니다.
   [참고] 배양 상층액 부피의 1/100 비율로 EV-Save™ 세포외 소포 차단 시약을 첨가하면 튜브 및 피펫 팁에 대한 EV의 흡착을 줄일 수 있습니다.
4. PS 친화성 법이나 기타 적절한 기법을 사용하여 배양 상청액에서 EV를 정제하십시오.

EV 입자 수 비교

각 배지에서 배양된 인간 골수 유래 중간엽 줄기세포(MSCs)의 세포 배양 상청액에서 PS 친화성 방법을 사용하여 EV를 정제하고, NanoSight 기기를 이용한 나노입자 추적 분석(NTA)을 통해 그 양을 정량화하였다.

[결과]
EV-Up™에서 배양된 MSC에서 방출된 EV 입자 수는 기존 배지에서 배양된 MSC에서 방출된 수보다 약 2.6배 더 많았습니다.

EV 마커 단백질 발현 비교

각 배지에서 배양된 인간 골수 유래 MSC의 세포 배양 상청액에서 PS 친화성 방법을 사용하여 EV를 분리했습니다. EV 마커 단백질(CD9, CD63, CD81)의 수준은 ELISA를 통해 측정했습니다.

[결과]
EV-Up™에서 얻은 세포 배양 상층액은 기존 배지에서 얻은 상층액보다 더 높은 수준의 EV 마커 단백질을 함유하고 있었습니다.

세포 생존율 비교

인간 골수 유래 MSC를 먼저 혈청 함유 배지에서 증식시킨 후, 각 배지에서 5일간 배양했습니다. 그 후 세포 생존율을 측정했습니다.

[결과]
EV-Up™에서 배양된 MSC는 기존 배지에서 배양된 MSC와 유사한 높은 생존율을 나타냈다.

다양한 배지에서 생성된 엑소좀(EV)의 항섬유화 활성

PS 친화성 정제법을 사용하여 인간 골수 유래 MSC의 세포 배양 상청액에서 엑소좀(EV) (5 × 10⁸ 입자/mL)을 정제하였다. 그런 다음 이 엑소좀을 TGF-β로 자극한 인간 태아 폐 섬유아세포(TIG3 세포)에 첨가했습니다. 항섬유화 활성은 RT-PCR을 이용하여 섬유화 마커인 콜라겐 III 및 α-SMA의 mRNA 수준을 정량화하여 평가했습니다.

[결과]
EV-Up™에서 배양된 MSC에서 생성된 엑소좀은 기존 배양액에서 생성된 엑소좀에 비해 더 강력한 항섬유화 활성을 나타냈습니다.