同仁化学　ミトコンドリア染色蛍光色素(MitoBright LTシリーズ)

MitoBright LTは、他とここが違う!!

• 長時間　細胞に滞在する

• 血清入りの培地で染色できる

既存の低分子のミトコンドリア試薬では、ミトコンドリアの長期的な観察をする際に課題がありました。
MitoBright LTシリーズは「3日以上の細胞内滞在性が必要」、「血清入り培地で染色したい」というお客様の声をもとに製品化した製品です。

4日以上培養した細胞でミトコンドリアを観察

HeLa細胞をHBSSにて洗浄後、各MitoBright LTまたは既存試薬にて染色し、血清入り培地に入れ替え、4日以上継続培養し、ミトコンドリアの観察を行った。
その結果、既存試薬は蛍光強度が4日後に大きく低下したのに対し、 MitoBright LTは蛍光強度が維持され、ミトコンドリアを明瞭に観察できた。さらに継続して培養を行った結果、 MitoBright LTは7日後もミトコンドリアに色素が滞留していることが確認された。

検出条件

MitoBright LT Green、既存試薬(T社)Green MitoBright LT Red、既存試薬(T社)Red MitoBright LT Deep Red、既存試薬(T社)Deep Red

：Ex 488 nm/Em 500-560 nm ：Ex 561 nm/Em 560-620 nm ：Ex 640 nm/Em 650-700 nm

タイムプス動画は同仁化学研究所HPで閲覧できます。

血清入りの培地で染色できる

MitoBright LTと既存試薬にて、血清有無の培地で染色した。既存試薬は血清入り培地で染色した場合、蛍光が暗くなるのに対し、MitoBright LTは血清入り培地中で染色しても蛍光強度が低下することなく、ミトコンドリアを明瞭に染色することができた。

検出条件

MitoBright LT Green、既存試薬(T社)Green MitoBright LT Red、既存試薬(T社)Red MitoBright LT Deep Red、既存試薬(T社)Deep Red

：Ex 488 nm/Em 500-560 nm ：Ex 561 nm/Em 560-620 nm ：Ex 640 nm/Em 650-700 nm

フローサイトメーターでの検出

• MitoBright LT Green

  
  Ex：488 nm
  Em：515 nm - 545 nm

• MitoBright LT Red

  
  Ex：488 nm
  Em：564 nm - 604 nm

• MitoBright LT Deep Red

  
  Ex：633 nm
  Em：650 nm - 670 nm

Jurkat 細胞(3.2 x 10⁵ cells/mL) をRPMI 培地 (10 % fetal bovine serum, 1 % penicillin-streptomycin) で35 cm ディッシュに播種し、37 ℃、5 % CO₂ インキュベーター内で一晩培養した。
培地を取り除き、MitoBright LT working solution (100 nmol/L, 5 mL) を添加し37 ℃ で30 分間インキュベートした。
溶液を取り除き、5 mL のRPMI 培地を用いて2 回洗浄した。
RPMI 培地を添加し、細胞培養を継続し、その細胞を2 日毎にフローサイトメーターで解析した。

コラーゲンコートプレートを用いたミトコンドリア検出

ミトコンドリアの形態評価は高倍率で観察するため、コラーゲンコートしたガラスプレートがよく使用されます。
既存のミトコンドリア染色試薬は、コラーゲンに吸着しバックグラウンドを上昇させる問題がありましたが、MitoBright LTシリーズはバックグラウンドの影響がなく鮮明にミトコンドリアを染色できます。

MitoBright LTは、既存試薬の課題(細胞内滞留性、血清入り培地での染色)を克服しています。
また、DMSO溶液のため、染色液の調整の手間がなくすぐに使用できます。

	MitoBright LT			既存試薬(T社)
	Green	Red	Deep Red	Green	Red	Deep Red
製品形態	DMSO溶液			固体
生細胞滞留性	〇	〇	〇	×	×	×
血清入り培地での染色	〇	〇	〇	△	△	△
染色後の固定化(PFA)	〇	〇	〇	〇	〇	〇
染色後の固定化(MeOH)	×	×	×	×	×	×

MitoBright LT 容量	蛍光顕微鏡	フローサイトメーター
	(35 mm dish, working solution 2mL/dish 使用した場合)	(working solution 1 mL 使用した場合)
20 μL	10 枚	20 回
400 μL x 1	200 枚	400 回
400 μL x 3	600 枚	1200 回

※100 nmol/L MitoBright LT working solutionを調製した場合。