MP Biomedicals社　マイコプラズマ検出キット

MP Biomedicals社では、4つのマイコプラズマ検出キットをラインアップしています。 いずれも試薬は使いやすいプレミックスタイプで、短時間で幅広いマイコプラズマ種を高感度に検出できます。

	Myco-Visible Mycoplasma LAMP Detection Kit	Myco-Sniff Mycoplasma PCR Detection Kit	Myco-Sniff-Valid Mycoplasma PCR Detection Kit	Myco-Sniff-Rapid Mycoplasma Luciferase Detection Kit
検出方法	LAMP	エンドポイントPCR	エンドポイントPCR	ルシフェラーゼアッセイ
所要時間	45分	3時間	3時間	20分
感度	1反応あたり ・10 fg ゲノムDNA ・10ゲノムコピー(16S rRNA)	20 CFU/mL	10 CFU/mL	高い
特異性	とても高い	とても高い	とても高い	高い

Myco-Visible Mycoplasma LAMP Detection Kitは、細胞培養におけるマイコプラズマ汚染の検出を目的とした高感度、迅速で特異的なアッセイキットです。
Myco-Visible Mycoplasma LAMP Detection Kitにより、Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma orale, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma pneumoniaeを含むモリクテス綱(マイコプラズマやウレアプラズマ)の 16S rRNA コード領域を増幅します。
1反応あたり 10コピーの16S rRNAコード領域、 または 10 fg のマイコプラズマgenome DNA で45 分以内に検出できます(サーマルサイクラー不要)。 Primer-BLAST による他の細菌、真菌、哺乳動物の DNA との交差反応性はありません。 色の変化(ピンク色から黄色)により、簡単に陽性の判定ができます。

特長

• 特別な機器は不要:：ドライバスだけで直接検出
• 迅速かつ包括的：マイコプラズマ属菌を 45 分で検出
• 高感度:：1反応あたり 10コピーの16S rRNAコード領域、または 10 fg のマイコプラズマ genome DNA を検出
• 使いやすさ: 革新的な比色検出システム - 鮮やかな色の変化

キット内容

• Master Mix
• Primer Mix
• Nuclease-free water
• Positive control

陽性/陰性の判定

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使用例 ~Myco-Visible Mycoplasma LAMP Detection Kitの分析感度試験~

8つのマイコプラズマ属菌株(第十八改正日本薬局方で検出対象とされる7菌種を含む)を使用して、10~10^3 コピー/uLの 10 倍段階希釈を行ったところ、10コピーの16S rRNAコード領域、または 10 fg のマイコプラズマ ゲノム DNA を検出できました。

フローチャート

Myco-Sniff Mycoplasma PCR Detection Kitは、PCR後のゲル電気泳動で増幅されたDNA断片のバンドを確認するだけで、細胞培養におけるマイコプラズマの存在を簡単かつ高感度(20 CFU/mL)に3 時間以内に検出できるキットです。
本キットで使用されるプライマー セットは、関連するマイコプラズマ種からの高度に保存された 16S rRNA をコードする DNA 配列から設計されているため、他のソースからの DNA の増幅を防ぎ、広範囲のマイコプラズマ種を検出できます。
また、マイコプラズマ汚染がないことに起因する陰性反応と PCR 阻害を区別するための外因性内部コントロールが含まれます。プライマーセットは、サイズによって区別される内部コントロールとターゲット DNA を増幅するために使用されます。 さらに、本キットには、テンプレート DNA の有効性を検証し、陽性サンプルの PCR 産物のサイズを確認するための陽性対照サンプルが付属しています。 以前の実験による PCR 産物による相互汚染を防ぐために、8-メトキシソラレン (8-MOP) もこのキットに含まれています。

特長

• 高感度(20 CFU/mL)
• 幅広いマイコプラズマ種を検出： 209 の個別種を含む 8 属以上
• 使いやすいプレミックス試薬：テンプレート DNA またはサンプルを追加するだけ
• 高い特異性：動物や細菌の DNA の干渉なし
• 短時間：3 時間以内に検出完了
• クロスコンタミネーションの排除：8-MOP が以前の検査由来の PCR 産物からのクロスコンタミネーションを防止
• 外因性内部コントロール：PCR 阻害または誤った PCR 検査による偽陰性を区別
• サンプルコントロール:：サンプルコントロール DNA の増幅チェックで、テンプレート gDNA の有効性を検証

キット内容

• Myco-Sniff™ Mycoplasma PCR Premix：48本
• Control DNA：25uL×3本
• DNase/RNase Free Water：1mL×1本

その他に必要なもの

• アガロース
• 実験用手袋(使い捨て)
• 電気泳動装置
• サーマルサイクラー
• ボルテックスミキサー
• ピペット/ピペットチップ

検出フロー

Myco-Sniff-Valid Mycoplasma PCR Detection Kitは、細胞培養物中のマイコプラズマを特異的、迅速、より高感度に検出するキットで、3 時間以内に10 CFU/ml という高感度での検出が可能です。
本キットには、高度に保存されたマイコプラズマ (M. pneumoniae、M. hyorhinis、M. fermentans、M. orale、および A. latelawii を含む)の16S-rRNA コード領域に特異的な一連のプライマーや、マイコプラズマ汚染がないことに起因する陰性反応と PCR 阻害を区別するための外因性内部コントロールが含まれます。プライマーセットは、バンドサイズによって区別される内部コントロールとターゲット DNA を増幅するために使用されます。
また、テンプレート DNA の有効性を検証し、陽性サンプルの PCR 産物のサイズを確認するための陽性対照サンプルも付属しています。
過去の実験由来の PCR 産物による相互汚染を防ぐために、8-メトキシソラレン (8-MOP) が本キットには含まれています。

特長

• 高感度(10 CFU/mL)
• 欧州薬局方(EP)準拠
• 幅広いマイコプラズマ種を検出
• 短時間：3 時間以内に検出完了
• 高い特異性：動物や細菌の DNA の干渉なし外因性内部コントロール：PCR 阻害または誤った PCR 検査による偽陰性を区別
• サンプルコントロール:：サンプルコントロール DNA の増幅チェックで、テンプレート gDNA の有効性を検証

キット内容

• Myco-Sniff-Valid™ Mycoplasma PCR Premix：48本
• Control DNA：25uL×3本
• DNase/RNase Free Water：1mL×1本

その他に必要なもの

• アガロース
• 実験用手袋(使い捨て)
• 電気泳動装置
• サーマルサイクラー
• ボルテックスミキサー
• ピペット/ピペットチップ

検出フロー

使用例

培養した各マイコプラズマ6菌種からゲノムDNA を精製し、電気泳動で検出したところ、6菌種すべてで10 CFU/mL以上の感度が得られた。

Myco-Sniff-Rapid Mycoplasma Luciferase Detection Kitは、細胞培養物中のマイコプラズマ汚染を20 分間で簡便かつ高感度に検出できるキットです。
本キットでは、ほとんどのマイコプラズマ種が持つマイコプラズマ代謝酵素の活性を利用します。 この酵素は真核細胞には存在しないため、マイコプラズマを特異的に検出できます。
マイコプラズマ存在下では、酵素は基質と反応して、ADP から ATP への変換を触媒します。 マイコプラズマ汚染は、ルシフェラーゼアッセイによる Myco-Sniff-Rapid 基質の添加前後のサンプル中の ATP レベルを測定することで検出できます。

注：検出には別途ルミノメーター(発光測定装置)が必要です。

特長

• 迅速：20 分で結果が得られる
• 高感度
• マイコプラズマに特異的
• 細胞培養培地成分への干渉なし
• 簡便な操作 - 培養上清に試薬を直接添加するだけ

キット内容	#3050401 (25 tests)	#3050402 (50 tests)
Myco-Sniff-Rapid Reagent (凍結乾燥品)	2本	4本
Myco-Sniff-Rapid Substrate (凍結乾燥品)	2本	4本
Myco-Free Water	1.5 mL×2本	1.5 mL×4本