組換えAAVの作製に!

Cell Biolabs社 AAVベクター試薬

アデノ随伴ウイルス(Adeno-Associated Virus;AAV)は欠陥のあるパルボウイルスに由来し、増殖のためにはアデノウイルスやヘルペスウイルスなどの他のウイルスが提供するヘルパー機能に依存しています。AAVは細胞性免疫反応や毒性を伴わないため、効率的かつ長期的な遺伝子導入が可能です。この長期的な遺伝子導入は遺伝子治療の分野で期待されています。Cell Biolabs社ではAAV発現システムにより組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)粒子を作製するプラスミド製品を提供しています。またヘルパーウイルスを必要としないシステムを導入しており、プラスミドでAAVのパッケージングに必要な遺伝子を導入します。

*本製品の使用の際には製造元の各種製品ページ内にあります「Manual/Data sheet」を必ずご覧ください。

pAAV-MCS Promoterless

組換えAAVの作製

目的の遺伝子をAAVのゲノムDNAに取り込んだ組換えAAVの作製には ①pAAV-MCS ②pAAV-RC ③pHelperの3種類のプラスミドをHEK293細胞などのウイルス産生細胞に導入する操作が必要となります。Cell Biolabs社では各種プラスミド製品を提供しています。

① pAAV-MCS
・・・ マルチクローニングサイトを含むプラスミドです。
② pAAV-RC
・・・ AAV各種が保有しているRep-Cap遺伝子を搭載しているプラスミドです。
③ pHelper
・・・ AAV増殖に必要なプラスミドです。
AAV産生までの流れ
ヘルパーフリーAAV発現

【作製可能な組換えAAVの種類】

  • AAV1
  • AAV2
  • AAV3
  • AAV4
  • AAV5
  • AAV6
  • AAV-DJ
  • AAV-DJ/8

AAV-DJは8つの異なる血清型AAVのDNAシャッフリングにより組換えAAVでハイブリッドカプシドを発現するシステムです。

8つの血清型:
AAV-2, AAV-4, AAV-5, AAV-8, AAV-9, トリAAV, ウシAAV, ヤギAAV

AAV-DJ/8はAAV-DJのヘパリン結合ドメインに点変異を入れることのできるシステムです。AAV-DJ/8システムから産生された組換えAAVは心臓や脳組織への感染においてAAV-8やAAV-9に類似しています。

カプシドDNAシャッフリングによるAAV-DJの作成

製品の種類

AAV発現プラスミド

① pAAV-MCS

  • AAV Bicistronic Expression Vector (IRES-GFP)

    MCSとGFP配列の間にIRES(internal ribosome entry site)配列を含むプラスミドです。

    挿入DNA配列の長さの上限:1.7kb

    プラスミドMAPはコチラ
  • AAV CMV Expression Vector

    CMVプロモーター配列を含むプラスミドです。

    挿入DNA配列の長さの上限:3kb

    プラスミドMAPはコチラ
  • AAV Promoterless Expression Vector

    プロモーター配列を含まないプラスミドです。

    挿入DNA配列の長さの上限:4kb

    プラスミドMAPはコチラ

② pAAV-RC

pAAV-DJ/8, pAAV-DJ/8, pAAV-KP1, pAAV-LK03はアカデミアなどの非営利団体のみの販売となります。
企業や営利目的でのご購入には別途ライセンス契約が必要となります。

③ pAAV-GFP

  • pAAVにGFP遺伝子を搭載したプラスミドです。pAAV-MCSのポジティブコントロールとしてご使用いただけます。

    プラスミドMAPはコチラ

AAVヘルパーフリーパッケージングキット

AAV Helper Free Packaging Systemsは各種ネイティブ血清型1~6およびAAV-DJとAAV-DJ/8のウイルス粒子構成のためのプラスミドを含んだキットです。(本キットにはpAAV-RCとpHelperが含まれており、pAAV-MCSはご自身でご用意する必要があります。)

pAAV-DJ/8, pAAV-DJ/8はアカデミアなどの非営利団体のみの販売となります。
企業や営利目的でのご購入には別途ライセンス契約が必要となります。

AAVヘルパーフリー発現キット

AAV Helper Free Complete Expression Systemsは各種ネイティブ血清型1~6およびAAV-DJとAAV-DJ/8のゲノムDNAを含んだウイルス粒子を作製するためのプラスミドを含んだ製品です。
AAV各種の発現システムにIRES-GFP、プロモーター発現、プロモーターレス発現プラスミド製品をラインアップしています。

AAV-1 Helper Free Expression Systems

AAV-2 Helper Free Expression Systems

AAV-3 Helper Free Expression Systems

AAV-4 Helper Free Expression Systems

AAV-5 Helper Free Expression Systems

AAV-6 Helper Free Expression Systems

AAV-DJ Helper Free Expression Systems

AAV-DJ/8 Helper Free Expression Systems

pAAV-DJ/8, pAAV-DJ/8はアカデミアなどの非営利団体のみの販売となります。
企業や営利目的でのご購入には別途ライセンス契約が必要となります

AAV各種の相対的な感染性

AAV各種の相対的な感染性

AAV精製キット

ViraBind AAV Purification Kitは超遠心をせずに細胞上清からAAVを精製するキットです。CellBio labs社では2種類のAAV精製キットを提供しています。

  • スタンダードキット(#VPK-140)・・・2.5mLの上清からの精製が可能。
  • メガキット(#VPK-141)・・・最大25mLの上清からの精製が可能。

精製の流れ

AAV Purification Standard Kit (#VPK-140)

Standard Kit (#VPK-140) AAV精製の流れ
プロトコールはコチラ

AAV Purification Mega Kit (#VPK-141)

Mega Kit (#VPK-141) AAV精製の流れ
プロトコールはコチラ

製品一覧

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pAAV-MCS

pAAV-GFP

pAAV-RC

AAV Helper Free Packaging Systems

AAV Helper Free Complete Expression Systems

AAV精製キット

  • 掲載内容は本記事掲載時点の情報です。仕様変更などにより製品内容と実際のイメージが異なる場合があります。
  • 掲載されている製品について
    【試薬】
    試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
    試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
    【医薬品原料】
    製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
  • 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
  • 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。