JNC セルファイン™ ホルミル
セルファイン™ ホルミルは多孔性セルロース粒子にホルミル基（アルデヒド基）を付加したリガンド固定化用ゲルです。共有結合によりリガンドを強固に固定化するため、リガンドの漏出が少ない安定したアフィニティ担体を作製することが可能です。またベース粒子は架橋セルロースであるため、アガロースをベースとした担体と比較し化学的安定性、機械的強度に優れています。
| 品名 | セルファイン™ ホルミル |
|---|---|
| リガンド | ホルミル基（アルデヒド基） |
| マトリックス | 真球状架橋セルロース |
| 粒径 | 125-210μm |
| 排除限界分子量 | 4000kD |
| タンパク質最大固定化量 (mg/mL-gel) | 40 (タンパク質の種類と反応条件により異なる) |
| 操作圧 | < 0.1Mpa |
| 保存液 | 0.2 M 酢酸Na緩衝液、 0.01% 2,2-thio-bis (pyridine-1-oxide)、pH3.0 |
特長
- リガンドの漏出を低減
共有結合によりリガンドを強固に固定
- 高流速で使用可能
産業スケールで使用可能な機械的強度
- タンパク質などの高分子を固定可能
市販 4% アガロース担体と同等の細孔サイズ
- 非特異的吸着を低減
未反応のホルミル基は簡単に水酸基へ還元可能
かつ非特異的吸着の少ない親水性スペーサーを使用 - 固定化反応に特別な装置は不要
簡単かつ緩和条件のカップリング反応で固定化が可能
流速特性
機械的強度に優れるため高流速で使用可能
- カラム
- ：16 x 200mm
アプリケーション
| 固定化リガンド | 精製対象分子 |
|---|---|
|
|
レクチン固定化担体の精製事例
レクチン（Concanavalin A：Con A）をセルファインホルミルに固定化して、糖タンパク質RCA (ricinus communis agglutinin) を精製した事例を示す。
50mgのCon A を1mLの0.1M酢酸バッファー (pH 6.4)、1mM MgCl2、1mM MnCl2 、1mM CaCl2、メチルα-Ｄ-マンノシドを含む溶液に懸濁して溶解したリガンドサンプルを0.5g（湿潤担体）のセルファインホルミルに加え4℃、終夜で反応した。その後、水素化シアノホウ素ナトリムを加えた後、4℃、終夜で反応させて共有結合した。
- サンプル
- ：66mL RCA(30mg/ml)
- カラム
- ：0.9 x 9mm (0.6mL) セルファインホルミル固定化Con A
- 洗浄バッファー
- ：0.1M NaCl
- 平衡化バッファー
- ：0.2M リン酸バッファー (pH 7.2)
- 溶出バッファー
- ：0.2M メチル-α-D-マンノシド
- 流速
- ：12cm/hr
セルファイン™ ホルミルのリガンド固定化方法
セルファイン™ ホルミルへのリガンドの固定化は迅速に反応が進行しますが、不安定な機能性タンパク質をリガンドとする場合、タンパク質の失活を防ぐために穏やかな反応条件にする必要があります。
タンパク質の活性を指標として最適な反応条件を決定することで優れたリガンド固定化担体を合成することができます。
反応時のパラメータにはpH条件、反応時間、反応温度などがあげられます。
カップリング効率（仕込量に対する固定化されたリガンド量）や固定化されたリガンド固定化量（担体に固定化されたリガンド濃度）はカップリング反応時のリガンド濃度、pH、反応温度、反応時間で容易に調整できます。産業スケールで使用する場合は、より良い固定化反応条件を探索することでコストパフォーマンスにすぐれたプロセスを構築することができます。
- 1）担体を純水で洗浄後、リガンドを含む反応バッファーを加える。
- 2）１～２時間、撹拌する。
- 3）還元剤を加える。
- 4）1～10時間撹拌する。
- 5）弱い還元剤を使用する場合、0.2M Tris/HCl (pH 7)または1Mエタノールアミンで未反応のホルミル基を還元する。水素化ホウ素ナトリウムの場合、条件によってはブロッキングは不要。
- 6）使用するバッファーなどで洗浄する。
- 7）カラムにパッキングする。
製品一覧
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