Biotium社 緑色蛍光色素 EvaGreen®
EvaGreen®はリアルタイムPCR(qPCR)で使用可能な次世代のDNA結合能を持つ緑色蛍光試薬です。EvaGreen®は高い輝度と感度を兼ね備えています。また、変異原性が低いため安全にご使用いただけます。
さらにSYBR® GreenⅠやその他の蛍光試薬と比較してPCRの阻害効果が弱いため高解像度融解曲線（HRM）において最適な蛍光試薬です。
また、PCRで増幅した産物を他の染色試薬を使用することなく、電気泳動後にUVイルミネーターなどを使用してゲル上で検出することができます。
EvaGreen®はBiotium社の登録商標です。
SYBR®はThermoFisher Scientific社の登録商標です。
製品概要
DNA結合のメカニズム
EvaGreen® DNA結合色素は ”release-on-demand” メカニズムによってDNAに結合します。
EvaGreen®は2つの単量体DNA結合色素で構成されており、DNAが存在しない状況では2つの単量体がループ状の構造を保持しているためDNA結合能が不活性化します。一方でDNAが存在する状況では、ループ構造が平衡して構造変化が起きます。構造が変化した色素がDNAに結合することで蛍光を発します。
この化学平衡はPCRによる新しいDNAの形成に伴って、色素が継続的に活性化されるためPCR反応における阻害効果を抑えることができます。その結果、EvaGreen®を比較的高い濃度でPCRバッファーに加えることができるため、qPCRやHRMの用途に適しています。
蛍光の安定性
EvaGreen®とSYBR® Greenをそれぞれ1.2µMとなるようにpH9.0 のTrisバッファーに加え99℃でインキュベートした。各溶液の吸光を3時間ごとに測定した。ROXを安定サンプルとして加えた。
EvaGreen®はSYBR® Greenと比較して蛍光が安定していた。
EvaGreen®の波長
特長
- 高い安全性
変異原性が低いため安全に取り扱うことができます。 - 高解像度融解曲線解析（HRM）に最適
PCR阻害が少ないため蛍光色素を最大濃度で添加することができます。 - マルチプレックスPCRとの互換性
増幅産物間での色素の移動が無いため融解曲線において複数のPCR産物の検出が可能です。
- 核酸増幅の検出に最適
SYBR® GreenⅠより輝度が高いため核酸増幅の検出に最適です。 - qPCRとゲル電気泳動の両方で使用可能
PCR反応後、他のゲル染色試薬を使用することなくUVイルミネーターなどで検出可能です。 - 様々なアプリケーションで使用可能
EvaGreen®はドロップレットデジタルPCR(ddpCR)で使用可能です。また等温増幅やマイクロ流体PCRやキャピラリー電気泳動にもご使用いただけます。
製品一覧
EvaGreen®溶液
| 製品名 | メーカーコード | 容量 | 溶媒 |
|---|---|---|---|
| EvaGreen® Dye, 20X in Water | 31000-T | 1 mL | 水 |
| 31000 | 5×1 mL |
EvaGreen® Plus 溶液
EvaGreen® Plus Dyeは EvaGreen® Dyeを改良した製品です。EvaGreen® Dyeの特長を保持したままqPCRやデジタルPCRを含む様々なアプリケーションで最適なS/N比を可能とします。
| 製品名 | メーカーコード | 容量 | 溶媒 |
|---|---|---|---|
| EvaGreen® Plus Dye, 20X in Water | 31077-T | 1 mL | 水 |
| 31077 | 5×1 mL |
EvaGreen®とEvaGreen® Plusの比較
(左)EvaGreen®とEvaGreen® Plusを使用した融解曲線解析での比較を行った。
EvaGreen® Plus（実線、濃い緑）はEvaGreen®（点線、薄い緑）と比較して二本鎖DNAに結合した際により高い蛍光を示し、融解後はバックグラウンドが低かった。
EvaGreen® qPCR マスターミックス
EvaGreen®を含むqPCRのマスターミックスです。Fastプロトコールに対応しており、HRM解析にもご使用いただけます。
| 製品名 | メーカーコード | 容量 | ROX | Fast プロトコール対応 | プロトコール |
|---|---|---|---|---|---|
| Fast EvaGreen® qPCR Master Mix | 31003-T | 1 mL | - | 〇 |  |
| 31003 | 2×1 mL | ||||
| 31003-1 | 5×1 mL | ||||
| 31003-2 | 50×1 mL | ||||
| Fast Plus EvaGreen® qPCR Master Mix | 31020-T | 1 mL | - | 〇 | |
| 31020 | 2×1 mL | ||||
| 31020-1 | 5×1 mL | ||||
| 31020-2 | 50×1 mL | ||||
| 31014-T | 1 mL | Low ROX | 〇 | ||
| 31014 | 2×1 mL | ||||
| 31014-1 | 5×1 mL | ||||
| 31014-2 | 50×1 mL | ||||
| 31015-T | 1 mL | High ROX | 〇 | ||
| 31015 | 2×1 mL | ||||
| 31015-1 | 5×1 mL | ||||
| 31015-2 | 50×1 mL |
対応機種
データ例
細胞毒性（細胞膜透過性）
Hela細胞をSYBR® GreenとEvaGreen®をそれぞれ1.2µMとなるように培地に加え37℃でインキュベートした。5分後と30分後でSYBR® Greenを加えた方では細胞が染色されたが、EvaGreen®では細胞内が染色されなかった。
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EvaGreen® Dye
EvaGreen® Plus Dye
EvaGreen® qPCR Master Mix
Fast Plus EvaGreen® qPCR Master Mix No ROX
Fast Plus EvaGreen® qPCR Master Mix Low ROX
Fast Plus EvaGreen® qPCR Master Mix High ROX
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