R&D Systems社 神経細胞培養用サプリメント
製品概要
本製品は、Bottensteinの組成1) を改良したもので、神経幹細胞の増殖に最適な条件を提供します。ビタミン、ホルモン、成長因子など血清含有培地に関連する制御できない成分を排除し、定められた条件下で細胞を培養することができます。
- Bottenstein, J.E. (1985) Cell Culture in the Neurosciences, Plenum Press: New York and London.
特長
- 神経細胞と幹細胞の培養に最適化
- リコンビナントヒトインスリンにより、実験のばらつきが低減
- 一貫性があり、化学的に定義された、血清不含の配合物
- NPCの誘導、維持、分化に最適
- 幹細胞の分化プロトコルの性能の向上
成分表
| 品名 | N-2 MAX Media Supplement (100X) | GMP N-2 MAX Media Supplement (100X), Animal-free |
N-2 Plus Media Supplement |
|---|---|---|---|
| メーカーコード | AR009 | AR016 | AR003 |
| Recombinant Human Insulin | 2,500 μg/mL | 2,500 μg/mL | - |
| Bovine Insulin | - | - | 2,500 μg/mL |
| Human Transferrin＊ | 10,000 μg/mL | - | 10,000 μg/mL |
| Recombinant Human Transferrin | - | 10,000 μg/mL | - |
| Putrescine | 1,611 μg/mL | 1,611 μg/mL | 1,611 μg/mL |
| Selenite | 0.52 μg/mL | 0.52 μg/mL | 0.52 μg/mL |
| Progesterone | 0.63 μg/mL | 0.63 μg/mL | 0.63 μg/mL |
＊このTransferrinはドナー血漿から精製されています。FDA承認の方法を用いてドナーレベルで検査され、HIV-1/2抗体およびB型肝炎表面抗原に対して非反応性であることが確認されています。
データ
N-2 MAX Media Supplementで増殖させた神経前駆細胞は、ネスティンとSOX2を発現する
ラット皮質幹細胞(#NSC001)は、1X N-2 MAX Media Supplement(#AR009)と20 ng/mLのリコンビナントヒトFGF basic(#233-FB)を含む培地で7日間培養された。細胞は、PE標識マウス抗ヒトネスチンモノクローナル抗体(#IC1259P；赤ヒストグラム）、PE標識マウス抗ヒト/マウス SOX2モノクローナル抗体(#IC2018P；緑ヒストグラム）、またはPE標識マウス IgG2Aアイソタイプコントロール(#IC003P；白ヒストグラム)で染色した。これらの条件下で、細胞は神経多能性の確立されたマーカーであるNestinとSOX2の高発現を示した。
N-2 MAX Media Supplementのロット間一貫性
ラット皮質幹細胞(RCSC)をN-2 MAXを使用して複数回の培養を経て培養し、フローサイトメトリーにより幹細胞マーカーであるSOX2とNestinの維持を評価した。フローサイトメトリーデータの定量化により、N-2 MAXサプリメントの複数のロットにおいて、(A)SOX2 陽性または(B)Nestin 陽性の RCSC が高純度であると示された。(C)SOX2 と Nestin 陽性の RCSC の平均値により、N-2 MAX のロット間の一貫した性能を証明した。
N-2 MAX Media Supplementを用いた神経前駆細胞の多能性検証
ラット皮質幹細胞(#NSC001)を、N-2 MAX Media Supplement(#AR009)を添加した培地でin vitroで7日間培養し、分化させた。
分化マーカーであるbeta-IIIは、 Mouse Anti-Neuron-specific beta-III Tubulin Monoclonal (clone TuJ-1) Antibody(#MAB1195)を用いて検出、NorthernLights™(NL)557-conjugated Donkey Anti-Mouse Secondary Antibody(#NL007；赤色)を使用した。GFAPはSheep Anti-Human GFAP Antigen Affinity-purified Polyclonal Antibody(#AF2594)で検出し、NL557-conjugated Donkey Anti-Sheep Secondary Antibody(#NL010; 赤色)を使用した。また、 Oligodendrocyte Marker O4 はMouse Anti-Human/Mouse/Rat/Chicken Oligodendrocyte Marker O4 Monoclonal Antibody(#MAB1326)で検出し、NL 557-conjugated Goat Anti-Mouse Secondary Antibody(#NL019; 赤色)を使用した。核はDAPI(青色)で対比染色した。
N-2 MAX Media SupplementはGMP N-2 MAXと同等
ラット皮質幹細胞(#NSC001)を、20 ng/mLのリコンビナントヒトFBF basic(#233-FB)を含む培地にN-2 MAX Media SupplementまたはGMP N-2 MAX Media Supplement(#AR016)を添加して14日間培養した。細胞を回収し、PE-conjugated Mouse Anti-Human Nestin Monoclonal Antibody(#IC1259)またはPE-conjugated Anti-Human/Mouse SOX2 Monoclonal Antibody(#IC2018)で染色した。これらの条件下で、NestinおよびSOX2陽性細胞の収量は同等であった。
製品一覧
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培地添加剤
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