CLARITY・PACT関連試薬
「CLARITY」は、新規組織透明化方法として、スタンフォード大学のKarl Deisseroth博士らよりNature誌で2013年3月に発表されました。 CLARITYは、蛍光タンパク質や抗体を用いた免疫染色が可能であることから、脳神経回路の解析に有用なツールであることが期待されています。
その後、「PACT(passive clarity technique)」が、2014年に発表されました。ビスアクリルアミドの除去と界面活性剤濃度を増加させることで、電気泳動を実施せずに受動的な組織透明化を実現しました。
VA-044は、論文プロトコルの透明化工程で使用される試薬になります。
参考文献
- Chung, K. et al. : Nature, 497, 332(2013).
- Yang, B. et al., : Cell, 158(4), 945(2014).
プロトコル
CLARITYプロトコル例
● Hydrogel Monomer Solution組成
- VA-044・・・・・・・・・・・ 1 g
- 40 %アクリルアミド ・・・・・40 mL
- 2 %ビスアクリルアミド・・・・10 mL
- 10 × PBS ・・・・・・・・・・40 mL
- 16 %パラホルムアルデヒド・・ 100 mL
- サポニン・・・・・・・・・・・200 mg
- 水・・・・・・・・・・・・・・210 mL
● 電気泳動バッファー組成
- ほう酸・・・123.66 g
- SDS・・・・400 g
- NaOH ・・・pH8.5になるように調整
- 水・・・・・10 Lまでメスアップ
● 脂質除去電気泳動槽
- Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction(日本エイドー)
● 循環ポンプ
- GPU-1、GPU-2(アズサイエンス)
PACTプロトコル例
● A4P0組成
- VA-044・・・・・・・・・・・0.25%
- アクリルアミド ・・・・・4%
- 上記を含むPBS溶液
● RIMS組成(RI 1.46)
- tween 20・・・0.1%
- アジ化ナトリウム・・・・0.01%
- 上記を含む0.02 M PBS・・・30 mL
- イオヘキソール・・・40 g
- NaOH ・・・pH7.5になるように調整
アプリケーションデータ
CLARITY処理によるマウス脳
CLARITY処理したマウス脳イメージング
CLARITY処理したマウス脳イメージング
図2. CLARITY処理したThy1-YFP(H Line) マウス大脳の蛍光観察
(A) 脳皮質から海馬までの3-D観察画像
(B) 大脳皮質Ⅴ層の錐体細胞の樹状突起画像
撮影条件：2光子
使用機材：Evident FV1000 正立顕微鏡、25倍液浸対物レンズ
(A) 脳皮質から海馬までの3-D観察画像
(B) 大脳皮質Ⅴ層の錐体細胞の樹状突起画像
撮影条件：2光子
使用機材：Evident FV1000 正立顕微鏡、25倍液浸対物レンズ
CLARITY処理 + 抗体を用いたマウス脳イメージング
図3. CLARITY処理後、Iba1抗体で染色したThy1-YFP(H Line) マウス大脳の蛍光観察
(A) 脳皮質中のミクログリア細胞3-D観察画像
(B) 皮質Ⅰ層を表層から観察した画像
撮影条件：1光子
使用機材：Evident FV1000 正立顕微鏡、25倍液浸対物レンズ
(A) 脳皮質中のミクログリア細胞3-D観察画像
(B) 皮質Ⅰ層を表層から観察した画像
撮影条件：1光子
使用機材：Evident FV1000 正立顕微鏡、25倍液浸対物レンズ
製品一覧
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CLARITY関連試薬
電気泳動槽
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