EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬

EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬は、エクソソームなどの細胞外小胞 (EV) が、マイクロチューブやピペットチップ、タンデンシャルフローろ過 (TFF) のろ過膜などへ吸着することを抑制するブロッキング試薬です。サンプルや精製後のEV溶液に添加するだけで吸着抑制効果を得ることができます。また凍結融解によるダメージからEVを保護する作用もあります。当社ではそれぞれの用途に最適化されたEV-Save™をラインアップしています。

製品ラインアップ

チューブやピペットチップなどへの
EV吸着を抑制したい
+
EVを凍結融解のダメージから
保護したい

EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬

EV吸着を抑制しつつ、
動物へ投与したい
+
EVを凍結融解のダメージから
保護したい

in vivo用
EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬

TFFろ過膜への
EV吸着を抑制したい
+
EVを凍結融解のダメージから
保護したい

TFF用
EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬

EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬は、EVがチューブやピペットチップなどの実験器具へ吸着するのを抑制するポリマーベースのEV吸着防止・凍結保護試薬です。実験中および保管中に生じるEVの減少を抑制し、回収率を高めます。また本製品は凍結融解からEVを保護する効果もあります。EVの限外ろ過、精製、保管の前に本製品をサンプルへ添加してご使用ください。

データ

吸着抑制効果

PSアフィニティー法により精製したCOLO201細胞由来EVにEV-Save™を添加し、3分静置した。その後、別のチューブに移し替え、これを繰り返した。サンプルチューブ内のEV量 (CD63シグナル) はPS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) により測定した。

[結果]
チューブを移し替えることでCD63シグナルは低下するが、EV-Save™を添加することで、チューブ移し替えによるシグナルの低下はほぼ完全に抑制された。

凍結保護効果

PSアフィニティー法により精製したCOLO201細胞由来EVにEV-Save™を添加し、凍結融解を行った。サンプルチューブ内のEV量 (CD63シグナル) はPS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) 、EVの形態は透過型電子顕微鏡を用いて解析した。

(1) ELISA

(2) 電子顕微鏡

[結果]
EV-Save™未添加のサンプルでは凍結融解によりCD63シグナルは低下するが、EV-Save™を添加することで、凍結融解によるシグナルの低下は抑制された。電子顕微鏡による観察でも粒子数の減少が抑制されていることが確認できた。

in vivo 用 EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬は構成成分に医薬品添加剤として使用実績のある成分のみを使用しています。実験動物へのEV投与などにもご使用いただけるEV吸着防止・凍結保護試薬です。

データ

吸着抑制効果

EV-Save™ (従来品) およびin vivo 用 EV-Save™をPSアフィニティー法により精製したCOLO201細胞由来EVに添加し、16時間、4℃で保管した。その後、サンプルチューブ内のCD9シグナルをPS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) により測定した。

[結果]
EV-Save™未添加の場合、CD9シグナルは低下したが、これはEV-Save™およびin vivo 用 EV-Save™を添加することにより抑制された。

凍結保護効果

EV-Save™ (従来品) およびin vivo 用 EV-Save™をPSアフィニティー法により精製したCOLO201細胞由来EVに添加し、1回もしくは3回凍結融解を繰り返した。その後、サンプルチューブ内のEV量 (CD9シグナル) をPS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) により測定した。

[結果]
EV-Save™未添加の場合、凍結融解によりCD9シグナルは低下したが、これはEV-Save™およびin vivo 用 EV-Save™を添加することにより抑制された。

タンジェンシャルフローろ過 (TFF) は、細胞外小胞 (EV) の濃縮やバッファー交換に有効な手法として利用されています。TFFは、ろ過膜と平行にサンプルを流すことで、メンブレンへのサンプルの堆積を防ぎ、サンプルのロスを最小限に抑えられます。一方で、EVのように吸着しやすいサンプルでは、ろ過操作中の吸着や物理的な負荷によって、収量が低下することが課題とされています。
TFF用 EV-Save™ 細胞外小胞ブロッキング試薬は、TFF処理時のサンプルへの負荷やメンブレンへのEV吸着を抑制することで、EVの回収率を向上させる専用試薬です。本製品を使用することにより、効率的かつ安定したEVの回収が可能となります。

データ

精製EVのバッファー交換における回収率向上

MassivEV™ EV Purification Column PS (コードNo. 131-19491) を用いて骨髄由来間葉系幹細胞 (BMMSC) および脂肪組織由来間葉系幹細胞 (ADMSC) の細胞培養上清からEVを精製した。その後、Repligen社のTFFシステムで、本製品を1/100量添加したHBSバッファーへバッファー交換をした。PS Capture™ エクソソームELISAキット(ストレプトアビジンHRP) (コードNo. 298-80601) を用いて、バッファー交換後のEV回収率を評価した。 検出抗体には抗CD63抗体もしくは抗CD81抗体を使用した。EVの粒子分布はNanoparticle Tracking Analysis (NTA) で測定した。

(1) ELISA

[結果]
本製品の添加によって、TFFを用いたバッファー交換においてEVの回収率が向上した。

(2) NTA

[結果]
本製品の添加によって、精製EVの粒子分布に大きな変化は見られなかった。

TFFを用いた細胞培養上清からのEV精製における回収率向上

TFFを用いて細胞培養上清を20倍に濃縮した。その後、100倍でバッファー交換を実施した。本製品は細胞培養上清と置換用バッファーそれぞれに1/100量となるように添加した。精製したEVの回収率はCD63とCD81のELISAで、粒子分布はNanoparticle Tracking Analysis (NTA) で測定した。

(1) ELISA

[結果]
本製品の添加によって、TFFを用いたEV精製においてEVの回収率が向上した。

(2) NTA

[結果]
本製品の添加によって、精製EVの粒子分布に大きな変化は見られなかった。

1. Welsh, J. A. et al.: J. Extracell. Vesicles, 13(2), e12404(2024).
   Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches
2. Evtushenko, E. G. et al.: PloS One, 15(12), e0243738(2020).
   Adsorption of extracellular vesicles onto the tube walls during storage in solution
3. 吉岡祐亮、落谷孝広編: 「決定版エクソソーム実験ガイド」, p.51 (羊土社) (2020).