PrimeSurface^® 96スリットウェルプレート

ヒト大脳皮質オルガノイド作製アプリケーション

ヒト多能性幹細胞 (hPSC) 由来の大脳皮質オルガノイドは、⼈間の脳発達や神経疾患の研究に役立つ有用なモデルです。これらのオルガノイドは、神経新⽣やグリア新⽣といった重要な発達過程を再現し、皮質の構造と機能を⻑期間にわたり研究可能にします。しかし、従来のプロトコールは⽣産効率が低く、hPSC 系統間でのばらつきが⼤きいことから再現性に課題がありました。 本研究では、PrimeSurface^®96 スリットウェルプレートを用いた改良プロトコールを開発し、複数のドナー由来細胞での作製効率および再現性を向 上しました。これにより、疾患関連の代謝異常を敏感に検出でき、神経変性疾患のメカニズム解明に貢献できます。

〈⽅法〉

96スリットウェルプレートを使用してhPSCから大脳皮質オルガノイドを作製しました。ウェル内でスフェロイドを形成し、その後特定のパターニング因子を用いて培養を行いました。対照群はマルチディンプルディッシュでスフェロイドを形成後、24時間後にディッシュに移し替えてオルガノイド培養を行いました。培養期間中、オルガノイドの形態とサイズを定期的モニタリングしました。96スリットウェルプレートを使用することで、効率的かつ再現性のある大規模なオルガノイド作製が可能となりました。

〈結果〉

96スリットウェルプレートで培養されたオルガノイドは、数の減少が最小限で、高い生存率、均一なサイズ、安定した成長を示しました。

Fig. 1　培養期間経過に伴うオルガノイドの数は、対照群 (破線) ではオルガノイド同士が融合し、減少した。96スリットウェルプレート (青実線) では融合による減少が防止され数が維持された。

Fig. 2　20日間培養後のオルガノイド生産効率。96スリットウェルプレートにおいて高いオルガノイド生産効率が維持された。

Fig. 3　対照群で生成されたオルガノイドは様々なサイズを示した一方、96スリットウェルプレート内のオルガノイドは安定した成長を示した。

〈考察〉

96スリットウェルプレートを用いた培養により、オルガノイドの生産効率とサイズ均一性が著しく向上し、従来法よりも安定した培養が可能となりました。これにより細胞株間および実験間のバラツキが低減され、再現性と信頼性の向上に寄与します。初期スフェロイドの形成の均一性も、培養の再現性を支える上で重要な役割を果たしました。

96スリットウェルプレートは、均一で安定した培養環境を提供し、大規模かつ効率的なオルガノイド生産を可能にします。実験のばらつきを低減し、オルガノイドベースの疾患モデルの標準化に貢献します。

• 96スリットウェルプレートを用いたヒト大脳皮質オルガノイド作製アプリケーション
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PrimeSurface^® スリットウェルプレートと iCell^® Hepatocytes2.0 によるスフェロイド作製と透明化

単独ではスフェロイドを作りにくい肝細胞のスフェロイドを安定して作製、透明化して観察することができた。

iCell^® 製品

ヒトiPS 細胞由来分化細胞製品群です。薬効スクリーニングおよび毒性評価等で再現性のある結果を得られる高純度・大量供給可能な細胞製品です。

【製品例】心筋細胞、肝細胞、マクロファージ、ドーパミン神経細胞など 多数

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