GCリンフォテック iStock

• 血清及び他種由来の成分を含まない
• プログラムフリーザー不要　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
• -80℃で急速かつ長期保存可能　　　　　　　　　
• 再生医療等製品材料適格性確認書取得済
• 保存液の調製が不要　
• 冷蔵保存で3年間使用可能

• ヒト末梢血単核球（PBMC）

  

  インフォームドコンセントの得られた健常人9名の血液より PBMCを分離し、OKT3抗体固相化フラスコとGCリンフォテック社リンパ球培養液を用いて4日間培養した。
  血清入り凍結保存液とiStockを用いて、増殖した細胞を1.5×10⁷ cells/mLに調整し、緩慢凍結法により-80℃で凍結した。翌日液体窒素タンクに移し、7日間保存したのち、解凍して回収率を比較した。（回収率=解凍後細胞数/凍結前細胞数×100%）

  ⇒　iStockは血清入り凍結保存液と同等の回収率を示した

• マウスES細胞

  

  増殖したマウスES細胞を、10% DMSO/Medium、iStock、product A、product Bを用いて4×10⁶ cells/mLの濃度に調整した。懸濁液1mLを凍結保存チューブ(n=4)に分注し、-80℃でfreezing containerを使用せずに凍結した。翌日液体窒素に移し、1週間保存した。
  37℃で素早く解凍し、遠心分離後、培養液で懸濁して生存細胞数を測定し、回収率を比較した。

  ⇒　iStockは他の凍結保存液よりも高い回収率を示した

• ヒトiPS細胞

  

  ヒトiPS細胞を3×10^6cell/tubeで凍結し（n=3) 、液体窒素で保存した。
  解凍後、培養容器に播種し、3日後に細胞数を測定した。

  ⇒　解凍後の増殖はiStockは他社品 procut Aよりも有意に良好だった

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  3.0×10^6 cellsのヒトiPS細胞を1mLの凍結保存液で懸濁し、凍結保存チューブに移して-80℃のフリーザーで細胞を凍結(各凍結保存液で 3本ずつ凍結)し、2日後に液体窒素タンクに移して保管。液体窒素(液相)で保管した凍結細胞を37℃に加温したドライバスで解凍し、iPS細胞専用培地2mLに懸濁後にトリパンブルー染色による計数法で生細胞の計測を実施(同一凍結保存液3本を計測し、平均を算出)。

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  各凍結保存液で凍結したヒトiPS細胞の凍結チューブを37℃に加温したドライバスで解凍後、iPS細胞専用培地に懸濁して遠心分離を行い、上清を取り除いて凍結保存液成分を除去。細胞のペレットをほぐし、2mLのiPS細胞専用培地を加え、予めラミニンコートした6wellプレートの1wellに播種し、37℃・CO2濃度5%の条件で3日目まで培養。培養終了後、細胞剥離液で細胞を剥離させ、トリパンブルー染色による計数法で生細胞の計測を実施(同一凍結保存液3本を計測し、平均を算出)。

• スフェロイド化細胞(HEK293T)

  試験概要

  HEK293T細胞を低吸着U底96ウェルプレートを用いてスフェロイド化し、他社品A・他社品B・iStockの3つの凍結保存液を用いて-80℃で凍結保存した。凍結から2週間後に細胞を解凍し、3日間培養を行って増殖能を評価した。

  試験結果

  WST-8を用いて細胞増殖能を測定したところ、他社品A・他社品B凍結した細胞と比較して、iStockで凍結した細胞は吸光度で高い値を示した。以上の結果より、iStockはスフェロイド化したHEK293T細胞の凍結保存に有用であることが確認された。

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