精製EV用 RNA定量キット

本製品は、細胞培養上清や血清・血漿などから精製したエクソソームなどの細胞外小胞 (EV: Extracellular Vesicle) のtotal RNAを定量するキットです。RNA結合性蛍光色素を利用することで、溶液中に含まれる微量RNAを高感度に定量することができます。EV研究において次世代シークエンス (NGS) やマイクロアレイの前工程でRNA定量が必要な場合にご使用ください。

特長

• 少量 (1-20 μL) のRNA検体で測定可能
• 高感度 (定量範囲: 0.1-10 ng/μL)
• 短時間測定 (反応時間: 5分)

適応

精製EV溶液

EVの単離・精製にはMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (コードNo. 290-84103)、RNAの抽出・精製には精製EV用 マイクロRNAエキストラクター^® キット (コードNo. 294-84601)がお使いいただけます。

1.試薬の調製

1x希釈液

: 希釈液 (20x) にヌクレアーゼフリー水を1:20となるよう添加し、よく混合する。

蛍光試薬溶液

: 蛍光試薬に1x希釈液を1:2,000となるよう添加し、よく混合する。 (アルミホイルを巻くなどして遮光)

コントロールRNA溶液

: コントロールRNAを下表に示すように段階希釈し、各濃度のRNA溶液を調製する。

RNA濃度 (ng/μL)	コントロールRNA溶液の容量	1x希釈液
100	コントロールRNA原液：100 μL	-
10	100 ng/μL溶液：10 μL	90 μL
5	10 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
2.5	5 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
1.25	2.5 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.625	1.25 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.3125	0.625 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.15625	0.3125 ng/μL溶液：50 μL	50 μL

上記の表は希釈の一例となりますので、サンプルに合わせてコントロールRNA溶液の濃度を調整してください。
例えば、COLO201細胞由来EVから抽出したRNAを定量する場合の段階希釈は以下を推奨します。

RNA濃度 (ng/μL)	コントロールRNA溶液の容量	1x希釈液
100	コントロールRNA原液：100 μL	-
1	100 ng/μL溶液：2 μL	198 μL
0.5	10 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.25	5 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.125	2.5 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.0625	1.25 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.03125	0.625 ng/μL溶液：50 μL	50 μL
0.015625	0.3125 ng/μL溶液：50 μL	50 μL

2.RNAの定量

精製EV由来RNAの定量

臍帯由来間葉系幹細胞の細胞培養上清からMagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (コード No. 290-84103) を用いて、EVを単離し、精製EV用マイクロRNAエキストラクター^® キット (コードNo. 294-84601) を用いてtotal RNAを抽出した。その後、本製品を用いて、抽出したRNA溶液5 μLのRNA量を測定した。

(1) 検量線

(2) RNA測定値

実測値 (RFU ⊿Blank)	RNA量 (ng)
4,239	0.977

[結果]
本製品を用いてEV中のRNAを定量可能であることが確認された。