SCALEVIEW-S

透明化可能組織

マウス脳、ヒト死後脳、骨 (脱灰処理が必要)、オルガノイド/スフェロイド

透明化に必要なもの (SCALEVIEW-S Trial Kitを使用した場合)

試薬

1. SCALEVIEW-S Trial Kit
2. deScale Solution (製品コード：041-34425)
3. パラホルムアルデヒド (製品コード：160-16061)
4. 1 x PBS (製品コード：164-25511)
5. アガロース

器具

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL　コニカルチューブ (サンプルに合わせて使用)
2. プラスチックペトリディッシュ (100 mm、60 mm 径若しくは 35 mm径) (サンプルに合わせて使用)
3. シーソーシェーカー
4. SCALEVIEW-S 透明化標本向け蛍光顕微鏡と推奨対物レンズ^※

• 屈折率（SCALEVIEW-A2 : RI=1.38, SCALEVIEW-S4： RI=1.47, SCALEVIEW-SMt : RI=1.49）に合った対物レンズをご用意ください。
  データ取得前にお手持ちの顕微鏡メーカーに確認することを推奨いたします。

• 1-2mm厚脳切片の組織透明化プロトコル
• 1-2mm厚脳切片の免疫組織染色プロトコル (AbScale法)
• 1-2mm厚脳切片の蛍光色素染色プロトコル (ChemScale法)
• スフェロイドの免疫組織染色プロトコル (AbScale法)
• スフェロイドの簡易透明化プロトコル

1-2mm厚脳切片の組織透明化プロトコル

マウス脳半球由来の1-2 mm厚スライスの場合

試薬使用量の目安
【透明化処理】透明化処理：各5 mL　洗浄：5 mL
【観察】5 mL

• 組織透明化プロトコルにおいては、サンプルサイズにより、使用する試薬量、処理時間が変わるので注意が必要です。
  また、サンプルはできるかぎり灌流固定後に摘出・再固定してください。

SCALEVIEW-Sを用いたマウス脳の透明化例

左から順に、マウス脳スライス(1 mm厚)のSCALEVIEW-S処理前後、マウス脳半球のSCALEVIEW-S処理前後

YFP-H lineマウスの透明化全脳を２光子励起顕微鏡で観察 ---大脳基底核部位を段階的にズームイン---

1-2mm厚脳切片の免疫組織染色プロトコル (AbScale法)

• SCALEVIEW 抗体染色プロトコル

マウス脳半球由来の1-2 mm厚スライスの場合

試薬使用量の目安
【前処理】前処理：10 ｍL　透過処理：各10 mL　洗浄：10 mL
【抗体染色】抗体染色：1.5 mL 洗浄：10 mL
【透明化】10 mL
【観察】10 mL

* AbScale Solution : 0.33 M 尿素、0.1 %(wt/vol) Triton X-100を含むPBS(-)溶液

アルツハイマーモデルマウス(17ヶ月齢)脳スライス(2 mm厚)のAbScale法による免疫組織染色画像例

1-2mm厚脳切片の蛍光色素染色プロトコル (ChemScale法)

• SCALEVIEW 蛍光色素染色プロトコル

マウス脳半球由来の1-2 mm厚スライスの場合

試薬使用量の目安
【前処理】前処理：10 ｍL　透過処理：各10 mL　洗浄：10 mL
【蛍光色素染色】蛍光染色：8 mL　洗浄：10 mL
【透明化】10 mL
【観察】10 mL

ChemScale処理(PI染色)したYFP-H lineマウスの脳半球スライス(2 mm厚)を共焦点レーザー走査型顕微鏡(倒立)を用いて観察

スフェロイドの免疫組織染色プロトコル (AbScale法)

試薬使用量の目安
【前処理】前処理：1.2 mL　透化処理：1.2 ｍL　洗浄：1.2 mL
【抗体染色】AbScaleプロトコルに基づく
【透明化】1.2 mL
【観察】1.2 mL

* AbScale Solution : 0.33 M 尿素、0.1 %(wt/vol) Triton X-100を含むPBS(-)溶液
**透明化後、1.5 %(wt / vol)アガロースを用いて包埋し不動化します。

アダルトラットの海馬から調製した神経幹細胞のNeurosphereの３次元免疫染色 ---AbScale法を使用---

スフェロイドの簡易透明化プロトコル

操作手順イメージ ⁴⁾

*透明化後、1.5% (wt/vol) アガロースを用いて包埋し、不動化することで観察が容易になります。

• YFP-H マウス海馬イメージング
• マウス脳スライス切片の血管染色観察例
• T47D細胞スフェロイド観察例
• ニューロスフェア3次元免疫染色
• F-POD^®透明化アプリケーション
• iCell^® Hepatocytes2.0透明化

YFP-H マウス海馬イメージング

エビデント製 対物レンズXLPLN25XSVMP (NA1.0, WD4mm)を用いて観察した例

YFP-H マウス脳のイメージング

エビデント製 対物レンズXLSLPLN25XSVMP (NA0.90, WD8mm)を用いて観察した例

マウス脳スライス切片の血管染色観察例

• Tomato Lectinによるマウスの血管染色プロトコル

T47D細胞スフェロイド観察例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

ニューロスフェア3次元免疫染色

F-POD^®透明化アプリケーション

サンプル　RLUN14：上皮内腺がん、細気管支肺胞上皮がん

サンプル　RLUN20

抗体 色素 顕微鏡 対物レンズ

：ZO-1-Alexa488 conjugate ：Actistain670 (ファロイジン) ：DAPI ：FV3000 ：UPLSAPO30×S

データ提供元：福島県立医科大学　高木　基樹先生、協力：エビデント株式会社

iCell^® Hepatocytes2.0透明化

詳しいプロトコルはこちら

1. Hama,H.et al. : Nature Neuroscience, 14, 1481(2011).
2. Hama,H.et al. : Nature Neuroscience, 18, 1518(2015).
3. Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
4. Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
5. Takahashi N, et al. : Cells, 8, 481 (2019).