ウサギモノクローナル抗体作製受託（DNA免疫法）
富士フイルムグループ独自の技術（公開番号：WO2024071374）「B-cell screening」による、ウサギモノクローナル抗体作製サービスです。
DNA免疫法とウサギモノクローナル抗体作製を併せることで、両者の特長を持つ、「高機能×高親和性」の抗体取得が期待できます。
お客様でお持ちの脾臓細胞をご提供いただき、モノクローナル抗体を樹立することも可能です。
ウサギモノクローナル抗体とは？
ウサギモノクローナル抗体とは、ウサギ由来の免疫系を用いて生成される単一の抗体のことです。ウサギは、その免疫系の特性により、特定の抗原に対して非常に高い特異性と親和性を持つ抗体を生成する能力があります。ウサギ抗体の特性から、基礎研究だけでなく、診断ツールや治療など、多岐にわたる分野で利用されています。特に、近年では、免疫療法やターゲット療法において、ウサギモノクローナル抗体が治療薬としての可能性が期待されています。
ウサギモノクローナル抗体の特長・メリット
免疫動物として、マウスやラットなどが使われていますが、ウサギを使用するメリットや特長としては下記のことが挙げられます。
1. 高い特異性
ウサギモノクローナル抗体は、ターゲット抗原に対して非常に高い特異性を持つことで知られています。これは、ウサギの免疫系が広範な抗原を認識する能力を持っているためです。高い特異性により、目的の抗原に対して正確に結合し、非特異的な結合を最小限に抑えることができます。これにより、実験や診断において正確な結果を得ることが可能です。
2. 高い親和性
ウサギモノクローナル抗体は、抗原に対する親和性が非常に高いのが特長です。これは、抗原と抗体の結合が強固であり、低濃度の抗原でも効率よく検出することができることを意味します。高い親和性は、感度の高い検出システムを必要とする用途において非常に有用です。
3. 多様なエピトープ認識能力
ウサギの免疫系は、非常に多様なエピトープ（抗原の特定部分）を認識する能力があります。これにより、ウサギモノクローナル抗体は、広範な抗原に対して反応することができ、新規抗原や変異抗原の研究においても有用です。
ウサギモノクローナル抗体の作製技術
ウサギ抗体のモノクローナル化は、技術的な理由から困難とされてきました。特に、モノクローナル抗体作製のゴールデンスタンダードである細胞融合法の効率が悪いことが技術的な壁になっていました。
当社は、細胞融合法ではなく、富士フイルムグループ独自技術（公開番号：WO2024071374）を加えたB-cell screening技術を導入することで、効率的にウサギモノクローナル抗体作製を可能にしました。
ウサギモノクローナル抗体×DNA免疫
DNA免疫法とは抗体作製方法のひとつです。
通常のモノクローナル抗体作製方法では、DNA情報から組み換えタンパクを調製するか、ペプチドを合成し、それらを抗原として免疫動物へ投与して抗体を取得します。一方、DNA免疫法は、プラスミドを直接免疫動物へ投与し、免疫動物の体内でターゲットタンパク質を発現させ、免疫を惹起します。 従来のタンパク質・ペプチド免疫法と比べ、「抗原タンパク質・ペプチドが不要」「抗原のコンタミネーションが起こらない」「抗原変性が起こらない」「ターゲット抗原の改変が容易」といったメリットがあります。
中和抗体（機能性抗体）を得られやすい点も特長のひとつです。
当社は、ラット・マウスにおいて、DNA免疫法による抗体作製で100件以上の実績を誇っており、多くのお客様に高機能な抗体をお届けしてきました。
DNA免疫法をウサギモノクローナル抗体とかけ合わせることで、両者の特長を持つ「高機能性×高親和性」の抗体取得が期待できます。
抗体医薬や診断薬に向けた次世代抗体として、ご利用いただくことが可能です。
サービスの流れ
Feasibility Study 抗体作製戦略の立案
ご依頼いただいた配列情報や使用目的を元に、in silicoでターゲットの構造および性質を分析し、抗体作製戦略を提案させていただきます。
加えて、最適な免疫領域および免疫方法、スクリーニング方法も報告書と共に提案させていただきます。
Milestone-1 哺乳細胞における抗原の発現解析
細胞表面での発現確認
上記Feasibility Studyで決定した内容に基づき、当社in-house発現ベクターにターゲット遺伝子をクローニングし、免疫プラスミドを作製いたします。
哺乳細胞に一過性発現後、フローサイトメーターにより細胞表面での抗原の発現をチェックします。
Milestone-2 ウサギ免疫
動物への免疫
作製した免疫用プラスミドをウサギに免疫いたします。免疫方法は皮下免疫です。2ヵ月程にわたって免疫を行なった後に抗血清を回収します。抗体価をMilestone-1で作製した一過性強制発現細胞を用いてフローサイトメーターにより評価します。また、抗血清は個体ごとに回収し、オプションでお客様へ評価用サンプルとしてお送りします。
また、動物実験の第三者認証・非認証施設の選択が可能です。
Milestone-3 B-cell cloningによるモノクローナル抗体作製
B-cell cloning：抗体価が上昇したウサギ個体の脾臓を採取し、脾細胞を取得します。脾細胞を約20万個の穴を持つプレート(チャンバー)に播種し、細胞を1つずつ分離します。お客様で採取した脾細胞をお送りいただき、Milestone-3から実施することも可能です。
1次スクリーニング
脾細胞を播種したチャンバー内で実施します。チャンバー内に抗原を膜上に発現させた細胞外小胞（エクソソーム）を塗布することで、膜タンパク質でもスクリーニングを行うことを可能にしました（公開番号：WO2024071374）。抗原に結合する抗体を分泌する細胞をピックし（最大44細胞）、1-cell PCRにより抗体遺伝子を増幅させます。
2次スクリーニング
増幅した遺伝子断片で哺乳細胞に簡易発現させ、フローサイトメトリーまたはELISAにより抗原結合性を確認します。オプションで、培養上清をお送りし（～数百μL）、お客様で評価いただくことも可能です。
クローニング
6クローンを選択いただき、抗体遺伝子を搭載した発現ベクターを構築します。発現ベクターを用いて、哺乳細胞に一過性発現させ、フローサイトメトリーまたはELISAにより抗原結合性と発現量を解析します。その後、抗体遺伝子をシーケンスし、抗体遺伝子配列と発現ベクターを納品いたします。
膜タンパクのスクリーニング技術
可変領域増幅
PCR断片での組換え抗体の抗原結合性確認
ベクターでの組換え抗体の抗原結合性確認
価格・納期
Feasibility Study
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| 抗体作製戦略の立案 | 2週間 | 95,000円 |
Milestone-1 哺乳細胞における抗原の発現解析
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| 哺乳細胞における抗原の発現解析 | 約1ヶ月 ※cDNA合成期間は含まない |
1,000,000円 ※cDNA合成を当社で実施する場合は別途費用が発生いたします。 ※抗原発現確認用の特異抗体を当社で調達する場合は別途費用が発生いたします。 |
Milestone-2 ウサギ免疫
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| ウサギ免疫(第三者認証対応) 3羽 ※AAALAC International（国際実験動物ケア評価認証協会）認証施設 ※ ウサギ=日本白色種の場合の価格。それ以外の系統になる場合は、別途追加料金が発生します。 |
2ヶ月～ | 2,000,000円 ※脾臓回収を実施する場合、別途250,000円/羽が発生いたします。 |
| ウサギ免疫(第三者認証非対応) 3羽 ※ ウサギ=日本白色種の場合の価格。それ以外の系統になる場合は、別途追加料金が発生します。 |
2ヶ月～ | 1,000,000円 ※脾臓回収を実施する場合、別途250,000円/羽が発生いたします。 |
Milestone-2 オプション
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| 免疫動物の羽数追加（4羽以上） | - | お問い合わせください |
| 追加免疫（3羽） | - | お問い合わせください |
| お客様所有の細胞株によるFCM解析 | - | 150,000円/株 |
| ELISAによる評価 | - | 100,000円/抗原 |
| 抗血清サンプル送付 | - | 30,000円/回 |
| エクソソームELISA ※抗血清を使用いたします。 |
- | 300,000円 |
Milestone-3 B-cell cloningによるモノクローナル抗体作製
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| B-cell cloningによるモノクローナル抗体作製 | 2～3ヶ月 | 4,000,000円 |
| B-cell cloningによるモノクローナル抗体作製 ※可溶化タンパク、抗原(リコンビナント・ペプチド)提供の場合 |
2～3ヶ月 | 3,500,000円 |
Milestone-3 オプション
| 試験名 | 納期 | 希望納入価格 |
|---|---|---|
| 追加プレートによるスクリーニング (再度1次スクリーニングを実施) |
- | 500,000円/回 |
| 追加プレートによるスクリーニング (1cellPCR・2次スクリーニングを実施) |
- | 1,500,000円/回 |
| 培養上清の送付（2次スクリーニング後） | - | 100,000円 |
| クローニング数の追加（7クローン以上） | - | 300,000円/クローン |
| ELISAによるスクリーニングの追加（2次スクリーニング） | - | 100,000円/抗原 |
| ELISAによるスクリーニングの追加（クローニング） | - | 100,000円/抗原 |
納品物
- 抗体遺伝子配列
- 抗体遺伝子（ベクター）
- 培養上清
- 報告書
お見積り・ご注文について
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- 掲載されている製品について
- 【試薬】
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- 【医薬品原料】
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